NEB助力新型冠狀病毒 2019-nCoV 快速診斷與研究
在 21 世紀的第一個十年，非典爆發(fā)。2003 年 7 月的數(shù)據(jù)顯示，SARS 病毒在全球 27 個國家造成了 8096 例感染病例，774人死亡。十年后，MERS 病毒引起的中東呼吸綜合征，又在 27 個國家?guī)砹?1728 例確診病例，奪走了 624 條生命。
2020 年關(guān)將至，冠狀病毒再一次洶涌襲來。2019 年 12 月 30 日，武漢市衛(wèi)生健康委員會醫(yī)政醫(yī)管處發(fā)布《關(guān)于做好不明原因肺炎救治工作的緊急通知》，通知稱武漢部分醫(yī)療機構(gòu)陸續(xù)出現(xiàn)不明原因肺炎病人，臨床表現(xiàn)均表現(xiàn)為病毒性肺炎或肺部感染。2020 年伊始，在科研人員的快速應(yīng)對下，檢出一種新型冠狀病毒，并獲得該病毒的全部基因組序列。世界衛(wèi)生組織正式將造成武漢不明原因肺炎疫情的新型冠狀病毒命名為：2019-nCoV。
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十七年前抗擊 SARS 的領(lǐng)軍人物鐘南山院士以 83 歲高齡再次掛帥出征，于昨日接受央視采訪時指出，目前已能肯定新型的冠狀病毒能“人傳人”。幾個小時前，武漢市衛(wèi)健委也發(fā)布消息，指出“武漢共有 15 名醫(yī)務(wù)人員確診為新型冠狀病毒感染的肺炎病例”。鐘南山院士表示：當前防控最有效的辦法就是早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早隔離。
從首例新型肺炎報告后的第 14 天，世界衛(wèi)生組織（WHO）宣布，已收到中國分享的從武漢不明原因病毒性肺炎病例中檢測到的新型冠狀病毒基因序列信息。到基因序列公布后的 1~2 天里，若干診斷公司根據(jù)病毒的 RNA 序列，先后宣布完成了新型冠狀病毒檢測試劑盒的開發(fā)。這些均得益于目前先進的測序手段及快速的診斷方法。當前，對冠狀病毒的診斷測試包括 RT-PCR，實時逆轉(zhuǎn)錄 PCR（rRT-PCR），逆轉(zhuǎn)錄環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增（RT-LAMP）以及實時 RT-LAMP。1 月 17 日，WHO 針對發(fā)布了新型冠狀病毒診斷方案：Diagnostic detection of 2019-nCoV by real-time RT-PCR（Charité Virology, Berlin, Germany）。
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近期，快速的診斷方案使各地新增病例得到快速確診，這增加了大家對疾病的警惕和防護，也可使流行病學(xué)監(jiān)測高效進行，以采取有效的預(yù)防措施和實施適當?shù)目共《局委煛τ谛滦凸跔畈《镜纳钊胙芯亢涂焖僭\斷方案，NEB 作為分子生物學(xué)領(lǐng)域的頭部供應(yīng)商，能夠提供從病原體核酸提取，到二代測序建庫、RT-qPCR 和 RT-LAMP 診斷試劑的一整套完整解決方案。
01 核酸提取
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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T2010S |
Monarch Total RNA Miniprep Kit |
50 preps |
- 全能：集樣本保存、細胞裂解、gDNA 去除為一體
- 廣泛適用：適用于培養(yǎng)細胞、血液、哺乳動物組織和病毒，及難裂解樣本，如細菌、酵母和植物。
- 高質(zhì)量：A260/280 和 A260/230 比值均≥1.8，高 RIN 值和極低 gDNA 殘留（gDNA 去除柱和 DNase I）。
- 高效：可純化總 RNA 包含小 RNA，通過改變結(jié)合條件可以選擇性地篩選＜200 nt 的 RNA，包含 miRNA、5S rRNA 和 tRNA。
- 下游應(yīng)用：提取純化得到的 RNA 可用于 RT-qPCR、cDNA 合成、RNA-seq、Northern blot 分析等下游實驗。
02 RT-qPCR
| 貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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E3005E |
Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit |
2500 rxns |
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E3005L |
Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit |
500 rxns |
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E3005S |
Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit |
200 rxns |
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E3005X |
Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit |
1000 rxns |
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E3006E |
Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit |
2500 rxn |
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E3006L |
Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit |
500 rxns |
|
E3006S |
Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit |
200 rxns |
|
E3006X |
Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit |
1000 rxns |
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M0372L |
Antarctic Thermolabile UDG |
500 units |
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M0372S |
Antarctic Thermolabile UDG |
100 units |
|
M0280L |
Uracil-DNA Glycosylase (UDG) |
5,000 units |
|
M0280S |
Uracil-DNA Glycosylase (UDG) |
1,000 units |
- 使用簡便：每個產(chǎn)品對應(yīng)一種應(yīng)用，方便的預(yù)混液形式及易操作的實驗步驟
- 性能優(yōu)異：Luna 系列產(chǎn)品經(jīng)過嚴格的優(yōu)化及檢測以確保特異性、靈敏度、精確性及可重復(fù)性
- 防污染：預(yù)混液中包含 dUTP，qPCR 前使用 NEB 的南極熱敏 UDG （NEB#M0372）或 UDG（NEB#M0280）進行預(yù)處理以防止產(chǎn)物殘留污染。
- 避免加樣誤差：肉眼可見的藍色惰性示蹤染料，避免加樣失誤
- 室溫建立體系：溫啟動的反轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動 Taq 酶共同提升了反應(yīng)特異性和穩(wěn)定性
03 等溫擴增
| 貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
|
M0275L |
Bst DNA Polymerase, Large Fragment |
8,000 units |
|
M0275M |
Bst DNA Polymerase, Large Fragment |
8,000 units |
|
M0275S |
Bst DNA Polymerase, Large Fragment |
1,600 units |
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M0275V |
Bst DNA Polymerase, Large Fragment |
800 units |
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M0328S |
Bst DNA Polymerase, Full Length |
500 units |
|
M0374L |
Bst 3.0 DNA Polymerase |
8,000 units |
|
M0374M |
Bst 3.0 DNA Polymerase |
8,000 units |
|
M0374S |
Bst 3.0 DNA Polymerase |
1,600 units |
|
M0537L |
Bst 2.0 DNA Polymerase |
8,000 units |
|
M0537M |
Bst 2.0 DNA Polymerase |
8,000 units |
|
M0537S |
Bst 2.0 DNA Polymerase |
1,600 units |
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M0538L |
Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase |
8,000 units |
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M0538M |
Bst 2.0 WarmStart? DNA Polymerase |
8,000 units |
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M0538S |
Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase |
1,600 units |
|
M0330L |
Bsu DNA Polymerase, Large Fragment |
1,000 units |
|
M0330S |
Bsu DNA Polymerase, Large Fragment |
200 units |
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E1700L |
WarmStart LAMP Kit (DNA & RNA) |
500 rxns |
|
E1700S |
WarmStart LAMP Kit (DNA & RNA) |
100 rxns |
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M1800L |
WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA) |
500 rxns |
|
M1800S |
WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA) |
100 rxns |
|
M0249L |
RecA |
1,000 ug |
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M0249S |
RecA |
200 ug |
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M2401S |
ET SSB |
50 ug |
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M0300L |
T4 Gene 32 Protein |
500 ug |
|
M0300S |
T4 Gene 32 Protein |
100 ug |
04 反轉(zhuǎn)錄
| 貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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E5310S |
OneTaq RT-PCR Kit |
30 rxns |
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E5315S |
OneTaq One-Step RT-PCR Kit |
30 rxns |
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E6300L |
ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit |
150 rxns |
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E6300S |
ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit |
30 rxns |
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E6560L |
ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit |
150 rxns |
|
E6560S |
ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit |
30 rxns |
|
M0253L |
M-MuLV Reverse Transcriptase |
50,000 units |
|
M0253S |
M-MuLV Reverse Transcriptase |
10,000 units |
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M0277L |
AMV Reverse Transcriptase |
1,000 units |
|
M0277S |
AMV Reverse Transcriptase |
200 units |
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M0368L |
ProtoScript II Reverse Transcriptase |
10,000 units |
|
M0368S |
ProtoScript II Reverse Transcriptase |
4,000 units |
|
M0368X |
ProtoScript II Reverse Transcriptase |
400,00 units |
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M0380L |
WarmStart RTx Reverse Transcriptase |
250 rxns |
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M0380S |
WarmStart RTx Reverse Transcriptase |
50 rxns |
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S1230S |
Random Primer 6 |
1.0 A260 units |
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S1254S |
Random Primer 9 |
1.0 A260 units |
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S1316S |
Oligo d(T)18 mRNA Primer |
5.0 A260 units |
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S1327S |
Oligo d(T)23 VN |
1.0 A260 units |
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S1330S |
Random Primer Mix |
100 μl (60 μM) |
05 二代測序
NEB 公司擁有十年開發(fā)二代測序建庫產(chǎn)品的經(jīng)驗，NEBNext 系列產(chǎn)品不斷在簡化工作流程、最小起始量、更高的文庫產(chǎn)量和質(zhì)量等方面進行優(yōu)化，助力更多科研工作者針對病毒樣本進行深入研究。
NEBNext 單細胞/超低起始量 RNA 文庫制備試劑盒（NEB #E6420）可直接從單個細胞或 2 pg-200 ng 的 RNA 構(gòu)建成全長轉(zhuǎn)錄本的高質(zhì)量文庫。優(yōu)化的cDNA 合成 & 擴增模塊（NEB #E6421）包含模板轉(zhuǎn)換，可單管完成從細胞裂解到 cDNA 的全部實驗流程。同時該試劑盒中的 NEBNext Ultra? II FS DNA 文庫制備試劑盒（NEB #E7805、E6177）可用于逆轉(zhuǎn)錄后的病毒 cDNA 文庫構(gòu)建，并提供 DNA 片段化試劑，將 DNA 片段化、末端修復(fù)和加 dA 尾優(yōu)化到一步，可在單管中完成，省去了繁瑣的純化步驟，進一步防止病毒樣品損失。
| 貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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E6420S/L |
NEBNext 單細胞/超低起始量 RNA 文庫制備試劑盒 |
24/96 rxns |
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E6421S/L |
NEBNext 單細胞/超低起始量 cDNA 合成 & 擴增模塊 |
24/96 rxns |
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E7805S/L |
NEBNext Ultra II FS DNA 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶 |
24/96 rxns |
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E6177S/L |
NEBNext Ultra II FS DNA 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶/含純化磁珠 |
24/96 rxns |
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溫馨提示：病毒流感高發(fā)期，請務(wù)必注意個人衛(wèi)生，勤洗手，保持居住環(huán)境的清潔，多開窗通風，盡量少去人多密集的公共場所，出門記得戴口罩。
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